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空白在食品卫生行业，大肠杆菌早已成为公认的卫生监测指示菌。近年来，由于大肠杆菌O157:H7引起的食源性疾病疫情频发，给人类健康带来严重危害，大肠杆菌快速检测技术亟待发展。一般来说， O157:H7感染剂量10个细胞就够了，对于易感人群来说，O157:H7感染剂量细胞数可能会更少。传统平板计数法，通常需要花费几天的时间来检定O157:H7。污染情况。例如，通过使用选择性培养基，抑制背景微生物生长，选择性扩大培养目标菌株，然后通过形态学加以观察检定，检测过程不仅耗费时间长，灵敏度也难以保证，并通常伴有较高的假阴性结果。对此，新的检测技术，如ELISA，PCR，微阵列探针以及流式细胞仪检测法等不断更新改进，特别是流式细胞仪检测法因其操作简单，容易进行快速，多参数的高通量检测，日益备受关注。近日，美国食品和药物管理局（FDA）刊发新文，采用Apogee超灵敏纳米流式分析系统，完善出大肠杆菌单细胞快速精准检测新方案。
空白实验方案采用Apogee超灵敏纳米流式分析系统，使得通常需要几天完成的实验，缩短至9个小时便可完成25个菠菜基质样品的大肠杆菌O157:H7污染情况检测，很好的解决了以往分析耗费时间长的问题；同时，文章对比实验显示：纳米流式分析法可明显提高检测灵敏度：完成大肠杆菌单细胞污染的样品检测，纳米流式分析法比传统检测法灵敏度高出三倍以上（65% vs 20% 阳性复检率）。实验方案列有纳米流式分析的所有准备工作，特别指出如何通过优化过程，省却大量离心和浓缩过程，提高检测效率和分析灵敏度，并且样品制备相关优化过程，均已得到美国FDA专家顾问Thomas Hammack的认可。而整个实验方案的关键技术环节在于，较好地利用Apogee纳米流式分析系统较宽的检测通道避免了背景大颗粒堵塞，省去了样品离心，分离及浓缩的过程，然后结合超高信噪比的散射光和荧光检测灵敏度，以及出厂优化的细菌分析用仪器设定参数，获得对O157:H7单细胞散射光和荧光信号的检测性能（图1），真正意义上为食品卫生行业大肠杆菌单细胞检测建立了省时，省力，灵敏，精确的检测新方案。 |
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图 1，左图，高分辨率散射光识别检测大肠杆菌E. coli O157:H7；
右图，特异性荧光染料检测大肠杆菌 E. coli O157:H7 |
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参考文献： Williams A J, Cooper W M, Ramsaroop S, et al. Rapid Flow Cytometry Detection of a Single Viable Escherichia coli O157: H7 Cell in Raw Spinach Using a Simplified Sample Preparation Technique[J]. Frontiers in Microbiology, 2017, 8: 1493 |
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